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培养BV2细胞时，最常遇到的问题就是细胞形态异常，通常伴随着细胞形状改变、拉丝较多等，对大家的实验造成影响。本期细胞学堂为大家整理了BV2细胞的培养方法、常见问题及处理方法，帮助您快速上手开展实验。
细胞生长特性
① 半贴半悬：悬浮和贴壁细胞比例不固定；
② 多形性：悬浮细胞为圆形，贴壁细胞既有圆形（饱满圆润，边缘亮）也有梭形（向两端伸出黑色突起）、多边形。
BV2细胞显微镜图
培养方法
BV2细胞的传代
01
用移液器吸出细胞培养瓶中的培养液（含有悬浮细胞），转移到无菌离心管A中；
02
用1 mL PBS润洗细胞，吸出PBS放入到上一步装有培养液的离心管A中；
03
培养瓶中加入1 mL胰酶，轻轻晃动培养瓶使胰酶浸润所有细胞，放入37℃培养箱静置消化（消化时间跟据细胞生长时间稍有不同，消化时间一般为2~4 min，可以消化1 min后拿出来在显微镜下观察，若还未消化完-全就放回培养箱继续消化，直到显微镜下看到细胞明显分离变圆，侧立培养瓶细胞有滑落迹象，可终止消化），全程不要拍打培养瓶；
04
培养瓶中加入3 mL含血清的培养基终止消化，轻轻吹几下将细胞吹落到液体中，再轻吹5~10下使细胞均匀分散，尽量在显微镜下呈单颗悬浮；
05
将培养瓶中的细胞悬液转移至离心管A中，1200 rpm离心3 min；
06
弃上清，加入2~3 mL新鲜培养基重悬沉淀，按传代比例分装到新的培养瓶或者皿中，补足培养基，最后轻吹几下让细胞分散均匀。
注意事项
BV2细胞是半贴壁半悬浮细胞，悬浮细胞和贴壁细胞的比例不固定，因此传代的时候需要单独收集悬浮和贴壁部分的细胞进行处理。如果悬浮的细胞不到10%，贴壁的细胞密度有80%以上，这个情况传代的时候也可以不收集悬浮细胞。
BV2细胞的冻存
冻存液推荐配比：
55%（基础培养基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；
注意事项
细胞到货稳定培养2~3代后，建议及时冻存保种，推荐冻存密度2~3×106 cells/mL。由于细胞冻存成功率往往无法达到百分-之百，一般建议边传代边冻存，每次冻存后需复苏一支冻存管验证细胞活率。
培养常见问题及处理方法
01
刚收到货时，细胞整体偏圆形较多，而后续培养时梭形较多是怎么回事？
细胞形态会随着密度的改变发生变化。BV2细胞增殖较快，到货时由于运输震荡的原因，部分细胞会出现收缩，此时细胞密度较高，圆形相对较多；在后续培养中，按照1:2~1:4传代24 h时，细胞主要以梭形为主；后续随着细胞密度越来越高，圆形细胞会逐渐变多。
02
传代培养时，发现细胞拉丝、触角较多，如何调整？
BV2细胞以较低密度传代后，容易出现拉丝、触角较多的情况。这种情况可以先收集培养基中悬浮或贴壁不牢的细胞于15 mL离心管中，贴壁的细胞用胰酶消化1 min左右后终止消化，收集消化下来的的细胞（多触角或者拉丝很长的细胞，短时消化不容易消化下来，可以被筛掉），然后计数传代，培养一段时间后细胞状态会有好转。没有消化下来的细胞也可以提高细胞密度传代，重复此步骤，收集偏圆形的细胞培养。
03
培养过程梭型细胞比圆形细胞多，梭型是不是细胞分化了？
细胞受到LPS刺激后易分化，而常规培养过程是不会自发分化的。关于哪种形态是分化，并没有统一的定论，有的文献描述分化细胞是长梭型细胞增加，有的文献称分化细胞偏圆形，建议通过检测相关的指标变化来判断是否分化。
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