Annexin V流式检测细胞凋亡的数据分析方法

示例：细胞用FITC-AnnexinV/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒检测效果图。Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin)(左)或未加药(右)处理4h，FITC-AnnexinV/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。AnnexinV-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，AnnexinV-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数...

查看详情>>

细胞传代时间经验技巧

养细胞的小伙伴们都知道，细胞一定要传代，因为细胞在培养过程中不断的繁殖，数量也随之增加，然而培养皿/培养瓶的空间有限，增殖受到抑制，所以必须将一部分细胞移至别的培养皿/培养瓶，让细胞有足够生长空间。细胞传代也不仅仅是为细胞安一个更大的“家”，更重要的，是使细胞系或细胞株进一步增殖，这样，我们才能有足够的细胞做各种各样的实验。但是，对于传代的时间，很多小伙伴都掌握不好，因为对于不同的细胞来说，判断能否开始传代的标准略有不同，今天，我们就主要来聊一下，细胞传代的时间问题。什么时候...

查看详情>>

如何避免胎牛血清沉淀物的产生

胎牛血清中可能出现的沉淀物是什么？①纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，可以用肉眼观察到。②磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。③胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质，它们也是血清中出现沉淀物的常见原因。关于细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。那...

查看详情>>

细胞的冻存与复苏

一、程序冻存步骤（需梯度降温）1、配置冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推荐使用Procell通用血清型程序冻存液，货号PB180436；2、制备好的细胞悬液计数，计算总细胞量；3、细胞离心后尽量吸干净上清，离心转速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL；5、分装入冻存管，一个冻存管分装1~1.5毫升；6、推荐使用程序降温...

查看详情>>

原代细胞的取材和分离方法

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。原代细胞培养的步骤一般是：取材→分离→培养和维持，今天我们重点介绍原代细胞的取材和分离方法。一、取材人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。取材的基本要求：①取材要注意新鲜和保鲜②应严格无菌③防止机械损伤④去除无用组织和避免干燥⑤应注意组织类型、分化程度、年龄等⑥作...

查看详情>>

原代细胞的复苏步骤

细胞一般储存在液氮中,温度达196°C,理论上储存时间是无限的。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以zuida限度的保存细胞活力。细胞复苏就是要把原本冷冻保存(冻存)着的细胞恢复到一般的生长状态,今天我们来看看原代细胞的复苏步骤。一、检查收到细胞株包裹时,请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形,若有请立即处理告诉寄方。细胞株请尽速开始培养,或立即冷冻保存(置于-70。C,隔夜后,移到iqN2)。二、冷冻细胞解冻1、依据细胞株说明书zhiding的基础培养基种类、血清...

查看详情>>

原代细胞传代方法哪有几种?

原代细胞是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞,称为原代细胞。-般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞I程等问题的研究。那么关于原代细胞的传代培养,我们应该怎么做呢?一般有以下两种方法:一、贴壁细胞的消化法传代1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或与ED...

查看详情>>